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      TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(綠色熒光)

      更新日期:2023-12-14

      訪問量:1742

      廠商性質:生產廠家

      所在城市:上海市

      簡要描述:
      TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(Alexa Fluor 488):
      細胞凋亡時,部分DNA內切酶會被激活,進而切斷基因組DNA。TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling) 細胞凋亡檢測試劑盒可以用來檢測組織細胞在凋亡晚期過程中細胞核DNA的斷裂情況。
      品牌其他品牌供貨周期現貨
      應用領域醫療衛生,生物產業

      其原理是在末端脫氧核糖核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的作用下,在基因組DNA斷裂時暴露出的3′-羥基(3′-OH)末端摻入被Alexa Fluor 488染料標志的dUTP,使凋亡的細胞被標志上綠色熒光,從而可以用熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測。

      本試劑盒為直接熒光標志法的TUNEL染色,染色步驟簡便,應用范圍廣泛,可用于檢測冰凍切片、石蠟切片和培養細胞的凋亡情況。
      包裝清單:

      產品編號產品名稱包裝1包裝2
      SJ1272TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(Alexa Fluor 488)20T50T
      說明書一份



      TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒產品組成:

      編號

      組分

      20T

      50T

      試劑(A)

      50× Proteinase K

      20 ul

      100 ul

      試劑(B)

      10 × DNase I Buffer

      100 ul

      500 ul

      試劑(C)

      DNase I

      20 ul

      100 ul

      試劑(D)

      Equilibration Buffer

      2 ml

      10 ml

      試劑(E)

      5×TdT Enzyme Buffer

      200 ul

      1 ml

      試劑(F)

      Recombinant TdT Enzyme

      20 ul

      100 ul

      試劑(G)

      Alexa Fluor 488-dUTP

      20 ul

      100 ul

      試劑(H)

      dATP

      20 ul

      100 ul

      試劑(I)

      封片劑(含DAPI)

      1.5 ml

      7.5 ml


      保存條件:

      -20 ℃保存,一年有效。

      操作步驟:

      1、樣本處理:

      a) 石蠟切片:經二甲笨、酒精脫蠟,復水。脫蠟應充分。

      b) 冰凍切片:流水沖洗,去除OCT包埋膠后,用純水洗3次。

      c) 細胞飛片:用組織固定液固定后,用PBS洗三次,每次5分鐘。1% Triton X-100處理10分鐘,用PBS洗三次,每次5分鐘。

      2、蛋白酶消化

      將1ul 試劑(A)50× Proteinase K稀釋于50ul PBS中,滴加到組織上,37℃孵育10-20分鐘。消化結束后,用PBS洗三次,每次5分鐘。

      3、陽性對照組織的處理

      將組織用DNase I消化,以獲得斷裂的DNA,即成Tunel染色陽性的對照。陽性對照組織也可以選用小鼠的小腸組織切片。

      純水

      46 ul

      試劑(B): 10 × DNase I Buffer

      5 ul

      試劑(C): DNase I

      1 ul

      共計

      50 ul

      將50 ul DNase I消化液滴加于組織上,37℃孵育10-30分鐘,消化結束后,用PBS洗三次,每次5分鐘。

      4、Tunel標志染色:

      Tunel標志染色前用50 ul Equilibration Buffer孵育標本5-10分鐘。孵育過程中按下表配制Tunel染色工作液。去除標本上的Equilibration Buffer后,直接滴加50ul Tunel染色液,37℃孵育1-2小時,染色結束后,用PBS洗三次,每次5分鐘。

      試劑(D)Equilibration   Buffer

      37 ul

      試劑(E)5×TdT Enzyme   Buffer

      10 ul

      試劑(F)Recombinant   TdT Enzyme

      1 ul

      試劑(G)Alexa Fluor   488-dUTP

      1 ul

      試劑(H)dATP

      1 ul

      共計

      50 ul

      5、封片:

      每組織上滴加一滴封劑,小心蓋上蓋玻片,避免產生氣泡。用吸水紙吸去多余的封片劑。熒光顯微鏡下觀察。


      注意事項:

      1、Proteinase K 消化時間需要摸索,冰凍切片 10 min 左右,石蠟切片時間應適當延長。

      2、陰性對照體系:配制Tunel染色工作液時用純水替代TdT Enzyme。

      3、懸浮細胞用離心的方法收集細胞,所有反應在離心管中進行,染色結束后,可在熒光顯微下觀察,也可以用流式細胞儀檢測。

      4、Tunel標志染色時應注意避光。

      5、實驗過程中請穿戴手套、實驗服等,做好個人防護。




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